Livraison de gènes basée sur l’électroporation in utero : une technique pour injecter de l’ADN plasmidique dans des cellules cérébelleuses embryonnaires d’embryons murins

Commencez par prendre un modèle de souris femelle enceinte anesthésiée placé en position couchée. Préparez la souris en enlevant les poils de la région abdominale. Inciser la peau et les couches musculaires sous-jacentes pour exposer les cornes utérines - les sites qui hébergent des embryons viables.

Maintenant, retirez les cornes utérines de la cavité abdominale. Prenez un capillaire de verre à pointe pointue contenant la solution d’ADN plasmidique souhaitée. Localisez le cerveau de l’embryon et injectez la solution d’ADN plasmidique à travers la paroi de l’utérus dans le quatrième ventricule. Cette position est antérieure au primordium cérébelleux - l’endroit souhaité pour l’administration éventuelle de l’ADN.

Après l’injection, rétractez le capillaire vide. Ensuite, pour l’électroporation de l’embryon injecté d’ADN, positionnez les deux électrodes sur la paroi utérine de sorte que l’électrode positive recouvre le primordium cérébelleux et que l’électrode négative couvre la région autour des oreilles.

Appliquez des impulsions électriques pendant la durée souhaitée. Ces impulsions rendent les cellules neuronales cérébelleuses perméables, ce qui permet à l’ADN plasmidique de pénétr