Modèle d’invasion périneurale murine : génération d’un modèle in vivo pour simuler l’invasion périneurale dans le nerf sciatique de souris

L’invasion périneurale est un phénomène métastatique rare dans lequel les cellules cancéreuses métastasent loin du site d’origine pour envahir l’espace périneural à l’intérieur des nerfs. Le microenvironnement nerveux fournit un environnement propice à la croissance et à la prolifération du cancer.

Pour simuler l’invasion périneurale in vivo, préparez une souris anesthésiée en position couchée. Faites une petite incision parallèle sous l’os de la cuisse - fémur. Séparez les muscles de la cuisse pour révéler le nerf sciatique sous-jacent - le nerf le plus grand et le plus facilement accessible du corps.

Le nerf sciatique prend naissance dans la partie inférieure de la colonne vertébrale et traverse les muscles pelviens jusqu’à chaque jambe. Il relaie des signaux pour un mouvement coordonné des membres inférieurs. Ensuite, retirez les muscles environnants du nerf et tirez-le vers l’extérieur à l’aide d’une spatule stérilisée pour le soutien de l’injection.

Maintenant, prenez une seringue remplie de suspension de cellules cancéreuses et injectez-la parallèlement dans le nerf. Un renflement visible dans le nerf confirme que l’injection a réussi, tandis que toute fuite autour du site d’injection indique une tentative ratée. Brièvement, laissez les cellules se stabiliser dans le nerf.

Ensuite, rétractez doucement l’aiguille et repositionnez les muscles. Par la suite, suturez l’incision. Laissez la souris récupérer. Finalement, les cellules cancéreuses commencent à migrer du site d’injection vers la moelle épinière, confirmant l’invasion périneurale.

La veille de l’opération, enlevez la fourrure le long de la longueur du fémur sur la face dorsale d’une souris C57BL/6J mâle ou femelle de 8 semaines à l’aide d’une tondeuse chirurgicale ou d’un agent d’épilation chimique. Le jour de l’opération, désinfectez le stade, anesthésiez les souris à l’aide d’isoflurane à 2 % dans une chambre d’induction et appliquez une pommade vétérinaire sur les yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie.

Injectez une quantité d’analgésique appropriée au poids par voie sous-cutanée et transférez une souris dans un cône nasal dans la zone chirurgicale. Un soutien thermique est fourni tout au long de l’intervention chirurgicale. Placez la souris anesthésiée sur sa face ventrale et fixez doucement chaque membre avec du ruban adhésif hypoallergénique pour créer une légère tension dans le membre à injecter.

Nettoyez le site d’injection avec un tampon de bétadine, puis à nouveau avec de l’alcool à 70 %. Répétez ce processus deux fois de plus et assurez-vous qu’il ne reste pas de cheveux lâches sur le terrain chirurgical. Comme dernière étape, appliquez la solution de bétadine sur la zone chirurgicale. Après avoir enfilé des gants stériles et placé le champ stérile, utilisez un outil stérile dédié pour appliquer une pince des orteils avant de faire l’incision sous le drapé.

Ensuite, utilisez de petits ciseaux stériles pour faire une incision de 1 centimètre à environ 2 millimètres en dessous et parallèlement au fémur. Rétractez la peau avec une pince latéralement pour exposer les muscles en dessous. Séparez les muscles fessier et biceps fémoral le long d’un plan fascial et exposez le nerf sciatique en dessous. Libérez le nerf des muscles environnants à l’aide d’une dissection émoussée.

Prélevez 3 microlitres de cellules cancéreuses de la pastille dans une seringue stérile de 10 microlitres. Placez une petite spatule métallique sous le nerf au point d’injection pour vous soutenir. Tout en visualisant avec le microscope de dissection, gardez l’aiguille parallèle au nerf et insérez-la dans le nerf. Veillez à ne pas percer l’arrière du nerf.

Injectez lentement les cellules dans le nerf pendant 5 secondes. La formation d’un bulbe dans la zone d’injection indique une bonne injection. Laissez l’aiguille en place pendant 3 secondes pour minimiser le reflux avant de retirer l’aiguille doucement. L’injection correcte des cellules cancéreuses dans le nerf sciatique est essentielle. Si les cellules sont injectées à l’extérieur du nerf, la consistance de l’invasion en souffrira. Cependant, avec de la pratique et de l’expérience, c’est très rare.

Après l’injection, remettez le nerf dans sa position d’origine et couvrez le nerf avec les muscles sus-jacents. Traitez les souris avec une analgésie appropriée, puis fermez la peau avec des sutures en nylon 5-0. Placez la souris seule dans une cage propre pour l’observation et fournissez un soutien thermique pendant la récupération jusqu’à ce qu’elle ait repris suffisamment de conscience pour maintenir le décubitus sternal.

• Perineural Invasion - A rare metastatic phenomenon where cancer cells invade perineural space within nerves.
• Sciatic Nerve - The largest nerve in the body, relays signals for lower limb movements.
• Fusiform Muscle - A type of muscle with a spindle shape, having a wider middle tapered at both ends.
• Murine Model - A research model that uses mice to study human diseases.
• Perineural Space - The area surrounding nerves, susceptible to cancer cell invasion.

• Introduce Perineural Invasion - Metastatic phenomenon involving nerve spaces (e.g., perineural invasion).
• Key Concepts - Incorporates anatomy of muscles and nerves (e.g., fusiform muscle, sciatic nerve).
• Underlying Mechanisms - Examines how cancer invades nerve spaces.
• Connect to Experiment - Shows perineural invasion in a mouse model (e.g., murine model).

• [Question 1] What is perineural invasion and how does it involve the sciatic nerve and fusiform muscle?
• [Question 2] What distinguishes the murine model in perineural invasion studies?
• [Question 3] What is the significance of the perineural space in perineural invasion?

• Practical Applications - Used in cancer research and therapy development (e.g., perineural invasion).
• Industry Impact - Relevant to healthcare and pharmaceutical sectors.
• Societal Importance - Benefits include better understanding of cancer metastasis (e.g., perineural invasion).
• Link to Scientific Advancements - Advances in in-vivo modeling techniques (e.g., murine model).