Administration intranasale de cellules souches neurales thérapeutiques (NSC) dans un modèle murin : une procédure d’administration ciblée sur la tumeur de NSC chargées de virus oncolytique dans un modèle de souris porteuse d’une tumeur cérébrale

Pour commencer, soumettez une culture de cellules souches neurales ou NSC à des conditions de faible teneur en oxygène. Ce préconditionnement facilite l’amélioration de la prolifération des NSC et des capacités de ciblage des tumeurs. Ensuite, récoltez les CSN et traitez-les avec la concentration souhaitée de virus oncolytique à réplication conditionnelle. Incuber pour charger les virus dans les cellules.

Maintenant, centrifugez la culture pour éliminer les virus non liés. Suspendez à nouveau les CSN chargées de virus dans un tampon approprié. Pendant ce temps, placez une souris anesthésiée porteuse d’une tumeur cérébrale en position couchée pour faciliter l’accès aux narines. Administrez soigneusement les NSC chargées de virus dans chaque narine de la souris, en répétant à de courts intervalles.

Laissez la souris récupérer. Les CSN administrées par voie intranasale dans la cavité nasale contournent la barrière hémato-encéphalique pour pénétrer dans le cerveau. À l’intérieur du cerveau, le virus se réplique à l’intérieur de ces cellules préconditionnées et migre vers le site de la tumeur, se protégeant ainsi du système immunitaire. Au fil du temps, les particules virales libérées par les NSC interagissent et se lient à des récepteurs de surface cellulaire spécifiques surexprimés sur les cellules tumorales.

Après l’internalisation du virus, ces virus à réplication conditionnelle se répliquent préférentiellement dans les cellules tumorales et provoquent la lyse cellulaire. Les cellules tumorales lysées libèrent des particules virales, qui infectent les cellules tumorales environnantes, entraînant une cascade d’infections et de lyse des cellules tumorales. La lyse cellulaire expose les antigènes tumoraux, activant une réponse immunitaire contre les cellules tumorales.

Pour charger des cellules souches neurales humaines avec le virus oncolytique, infectez les cellules souches avec 50 répliques conditionnelles de particules virales d’adénovirus par cellule selon les protocoles standard de transfection d’adénovirus pendant 2 heures à température ambiante avec tapotement périodique. Ensuite, lavez les cellules trois fois avec un milieu frais pour éliminer toutes les particules virales non liées et suspendez les cellules dans une solution saline stérile pour une administration intranasale.

Lorsque les cellules ont été modifiées de manière appropriée sur le plan expérimental, placez les animaux tumoraux anesthésiés en position couchée sur un drapé propre au-dessus d’un coussin chauffant et placez un oreiller rembourré sous la tête pour maintenir les narines à un angle droit. Le matériau de l’oreiller doit être soit du plastique essuyable à l’alcool, soit des essuie-tout enroulés jetables pour éviter la contamination croisée des animaux.

Lorsque les souris sont en position, utilisez une micropipette pour distribuer 2 microlitres de la population expérimentale de cellules souches neurales humaines d’intérêt dans chaque narine de la première souris, en confirmant visuellement l’aspiration de la gouttelette avant d’appliquer le volume suivant de cellules. Répétez l’exécution à chaque souris à tour de rôle. Ensuite, attendez 5 minutes et appliquez la prochaine série de cellules. Lorsque les quatre séries de cellules ont été administrées, placez les animaux dans une chambre de récupération avec surveillance jusqu’à ce qu’ils se rétablissent complètement.

• Neural Stem Cells (NSCs) - Preconditioned cells exposed to low oxygen for improved proliferation.
• Cell Washing Procedure - A method to remove unbound entities, in this context, virus.
• Stem Cell Flow Chart - A graphical representation to outline the stem cell procedures.
• Murine Stem Cell Virus - An oncolytic virus used in research for its tumor-targeting properties.
• Stem Cell Delivery - Process of injecting stem cells (here, into nostrils).

• Introduce NSCs - Neural stem cells enhanced for tumor-targeting (e.g., NSCs).
• Key Concepts - Overview of oncolytic virus utilization within NSCs (e.g., theory of stem cell delivery).
• Underlying Mechanisms - NSCs carry virus to brain tumors, leading to cell lysis (e.g., mechanisms of murine stem cell virus).
• Connect to Experiment - Experiment uses virus-loaded NSCs injected into mice nostrils, targets brain tumor.

• [Question 1] What are neural stem cells and how do they target tumors?
• [Question 2] How does the process of cell washing work?
• [Question 3] What role does the murine stem cell virus play in tumor destruction?

• Practical Applications - Invasive brain tumor treatments (e.g., using NSCs).
• Industry Impact - Potential benefits for cancer treatment sectors (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improved life quality of brain tumor patients (e.g., via better treatment options).
• Link to Scientific Advancements - A step forward in oncolytic virus research and NSC technology.