Dosage de la phagocytose in vitro : une méthode basée sur l’imagerie en direct pour étudier la phagocytose des synaptosomes médiée par les astrocytes en temps réel

Les synaptosomes sont des fractions neuronales isolées riches en vésicules synaptiques. Ces synaptosomes sont engloutis par les astrocytes - une population de cellules immunitaires dans le cerveau - par un processus connu sous le nom de phagocytose.

Pour étudier in vitro la phagocytose médiée par les astrocytes, il faut commencer par prendre une plaque de culture contenant une monocouche d’astrocytes. Maintenant, ajoutez une suspension de synaptosomes conjugués à l’indicateur de pH dans la plaque. Ce colorant indicateur a la propriété d’être fluorescent exclusivement à un pH bas. Incuber la plaque pendant la durée souhaitée.

Pendant l’incubation, la phosphatidylsérine ou PS présente sur la membrane externe du synaptosome lui permet de se lier aux récepteurs PS correspondants sur la membrane astrocytaire. Cela facilite l’installation des synaptosomes à la base. Aspirez le milieu épuisé ainsi que les synaptosomes non liés de la plaque.

Ensuite, complétez la plaque avec des facteurs favorisant la phagocytose et incuber. Par la suite, imagez la plaque à l’aide d’un microscope à fluorescence. Lorsqu’ils se lient à la surface, les astrocytes engloutissent les synaptosomes, ce qui les fai