Électroporation ex vivo de tranches cérébelleuses d’embryons de poulet : une méthode d’introduction d’ADN plasmidique codant pour une protéine fluorescente verte pour visualiser le développement cellulaire granulaire

Les

cellules granulaires cérébelleuses sont le type de neurones le plus abondant du cerveau. La couche granulaire externe, EGL, est composée uniquement de précurseurs de cellules granulaires, GCP, qui se différencient et migrent vers l’intérieur pour former la couche granulaire interne, IGL.

Pour visualiser le développement de cellules granulaires, préparez une chambre d’électroporation en fixant une anode à la base d’une boîte de Pétri. Ajouter un milieu de culture pour couvrir l’électrode. Maintenant, placez un insert de culture sur l’électrode recouverte de moyen. Transférez les tranches de cervelet de l’embryon de poulet sur l’insert de culture dans une orientation sagittale.

Le plan sagittal permet d’identifier la couche cible-EGL contre différentes couches du cervelet. Ajouter une solution de colorant visqueux contenant un ADN plasmidique GFP sur EGL. L’ADN plasmidique GFP code pour une protéine fluorescente verte qui se distribue de manière homogène dans le cytoplasme cellulaire et permet l’imagerie de cellules vivantes.

Ensuite, placez une cathode dans le milieu près de l’EGL mais pas directement sur le tissu. Ensuite, appliquez plusieurs impulsions électriques à différente