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Chez la souris, le cervelet est situé à la base du cerveau antérieur et se compose de deux hémisphères latéraux reliés par une ligne médiane - vermis. Le cervelet, qui contient la majorité des neurones du cerveau, est vital pour les études neurologiques.
Pour générer des tranches de cervelet, commencez par une tête de souris décapitée. Insérez des ciseaux dans le foramen magnum - l’ouverture à la base du crâne. Incisez doucement le crâne et retirez-le. Ensuite, retournez le cerveau et coupez les nerfs optique et trijumeau. Relâchez le cerveau dans un milieu de dissection réfrigéré avec sa face dorsale vers le haut. Séparez le cerveau postérieur des autres parties du cerveau.
Ensuite, coupez les pédoncules cérébelleux sous-jacents - la connexion entre le cervelet et le tronc cérébral - pour détacher le cervelet. Retirez les méninges du cervelet. Placez soigneusement le cervelet sur une plate-forme de hachoir en tissu perpendiculaire à la lame du hachoir. Maintenant, disséquez les tranches de tissu d’épaisseur appropriée. Mouillez immédiatement les tranches et transférez-les dans la boîte de Pétri contenant le milieu de dissection.
Séparez et identifiez les tranches du vermis. Transférez les tranches sélectionnées dans un puits inséré dans une plaque de culture contenant un milieu de croissance approprié. Incuber la culture pour maintenir l’intégrité structurelle et fonctionnelle des tranches cérébelleuses disséquées pour d’autres expériences.
Pour commencer, insérez doucement un petit ciseau dans le foramen magnum et coupez le crâne en faisant une incision latérale vers le côté puis coupez tout autour de la tête du crâne. Pour récupérer la partie dorsale du crâne, utilisez une pince fine et droite pour soulever délicatement la partie dorsale du crâne.
Ensuite, introduisez soigneusement la pince entre le crâne ventral et le cerveau. Retournez doucement le cerveau et coupez les nerfs optique et trijumeau avec de petits ciseaux. Ensuite, retournez la tête ou la partie dorsale du crâne juste au-dessus d’une boîte de culture cellulaire de 60 millimètres contenant un milieu de dissection glacé pour aider le cerveau à tomber par gravité.
À l’aide d’une pince fine, orientez le cerveau avec la face dorsale vers le haut et la face ventrale couchée. Sous le microscope binoculaire, utilisez la pince fine et droite pour immobiliser le cerveau du côté du cerveau antérieur. Ensuite, séparez le cerveau postérieur du reste du cerveau. Coupez les pédoncules cérébelleux sous le cervelet pour séparer le cervelet du reste du cerveau postérieur.
Une fois le cervelet isolé, utilisez une pince fine et droite pour arracher soigneusement les méninges. Tenez doucement le cervelet à l’aide de la fine pince incurvée et placez-le avec le côté dorsal vers le haut sur la plate-forme en plastique perpendiculaire à la lame de rasoir du hachoir. Ensuite, à l’aide d’une pointe de pipette stérile à extrémité mince fixée à une pipette de 1 millilitre, aspirez tout excès de milieu de dissection autour du cervelet. Ensuite, à l’aide d’un hachoir à tissus, des sections sagittales de 300 micromètres d’épaisseur du cervelet.
Ensuite, ajoutez doucement une goutte de milieu de dissection sur le cervelet tranché. Ensuite, à l’aide d’une pointe de pipette de large calibre fixée à la pipette de 1 millilitre, aspirez lentement le cervelet tranché et transférez-le à nouveau dans la boîte de culture cellulaire de 60 millimètres contenant un milieu de dissection glacé.
Ensuite, utilisez deux pinces fines et droites pour séparer les tranches individuelles. Ensuite, à l’aide d’une pointe de pipette de large calibre fixée à la pipette de 1 millilitre, transférez jusqu’à quatre tranches sélectionnées du vermis avec un peu de milieu de dissection sur un insert de culture d’une plaque à 6 puits. Retirez tout excès de milieu de dissection autour des tranches à l’aide d’une pointe de pipette à extrémité fine.