Isolement des neurones de la moelle épinière : une procédure de gradient de densité pour isoler les neurones de la moelle épinière néonatale pour les études in vitro
Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 6:10 min • December 22nd, 2025
[INSÉREZ FIGURE1 ICI]
Figure 1 : Colonne vertébrale disséquée et moelle épinière libérée d’une souris nouveau-née âgée de 3 jours. La flèche en (a) pointe vers l’extrémité caudale de la colonne vertébrale, où une aiguille est insérée pour libérer la moelle épinière. Une moelle épinière libérée (b) est représentée immergée dans le PBS.
[INSÉREZ FIGURE2 ICI]
Figure 2 : Gradient de densité, avec cellules ajoutées après centri
Pour isoler les neurones de la moelle épinière, prenez une colonne vertébrale d’une souris néonatale et placez-la sur une boîte de Pétri. Rincer la colonne vertébrale avec un tampon salin pour libérer la moelle épinière. Transférez la moelle épinière dans un milieu neuronal froid pour favoriser la survie cellulaire.
Ensuite, hachez la moelle épinière et transférez les fragments dans un tube contenant un milieu neuronal frais. Incuber le tube dans un bain-marie pour l’acclimatation. Après l’incubation, retirez le milieu épuisé et ajoutez le milieu de digestion. Les enzymes digestives clivent la matrice tissulaire pour desserrer les cellules.
Effectuez la trituration en aspirant les fragments de tissu dans la pipette et videz rapidement les composants, libérant les cellules individuelles en suspension. Ensuite, transférez cette suspension dans un tube contenant un milieu à gradient de densité et centrifugez.
Après la centrifugation, la couche superficielle du tube contient des débris tissulaires. La première couche comprend des oligodendrocytes et des astrocytes. Les deuxième et troisième couches comprennent des neurones, la troisième couche ayant la pureté la plus élevée. Enfin, la
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques