Chargement de billes pour introduire des acides nucléiques dans des cellules cultivées adhérentes : une technique pour charger des plasmides codant pour des protéines fluorescentes dans des cellules de mammifères adhérents

Commencez par une culture de cellules de mammifères adhérentes dans une plaque de culture. Transférez des billes de verre stérilisées, traitées à l’alcali, de taille d’un micron, dans la chambre d’un appareil de chargement de billes personnalisé. Couvrez l’ouverture de la chambre à l’aide d’un treillis avec des ouvertures de taille optimale pour permettre aux billes de passer à travers pendant le chargement. Fixez le treillis à l’aide d’une chambre d’imagerie.

Retirez le support de la plaque. Pipeter une suspension d’ADN plasmidique codant pour une protéine rapporteure fluorescente dans la plaque pour une distribution uniforme sur les cellules. À l’aide de l’appareil de chargement de billes, dispersez doucement une monocouche de billes de verre sur les cellules. Tapotez brièvement la plaque de culture avec la force appropriée.

Les billes de verre roulent brièvement sur les cellules adhérentes, tandis que le traitement alcalin les rend moins adhérentes aux cellules. L’impact des collisions entre les billes et les cellules transmet une tension adéquate, créant des perturbations localisées dans les membranes cellulaires. Ces pores transitoires formés de petites dimensions facilitent l