Coloration périodique à l’acide des cellules : une technique in vitro pour détecter les niveaux de glycogène dans les cellules mononucléées du sang périphérique

Les cellules mononucléées du sang périphérique, ou PBMC, sont des cellules sanguines circulatoires avec des noyaux uniques et volumineux, comprenant des lymphocytes B et T, des cellules tueuses naturelles, des monocytes et des cellules dendritiques. Les PBMC stockent l’excès de glucose sous forme polymérique sous forme de glycogène - un polysaccharide ramifié - dans leur cytoplasme.

Pour détecter la présence de glycogène dans les PBMC, préparez un frottis uniforme de PBMC isolés sur une lame de verre. Traitez les cellules avec du formol - une solution fixatrice, qui relie les biomolécules cellulaires, préservant ainsi l’intégrité structurelle des PBMC.

Immerger partiellement la lame dans une solution d’amylase. Cette enzyme pénètre dans les cellules et hydrolyse le glycogène dans les cellules traitées. Il en résulte deux populations cellulaires distinctes : les cellules riches en glycogène traitées aux enzymes, déficientes en glycogène et les cellules riches en glycogène non traitées à l’amylase.

Recouvrez-les d’une solution acide périodique qui convertit par oxydation les groupes hydroxyles des molécules de glycogène en aldéhydes.

Rincez la lame à l’eau pour arrêter la réaction d’