Électrophorèse sur gel de polyacrylamide de dodécylsulfate de sodium pour l’analyse des protéines : une technique pour séparer et visualiser les protéines en fonction de leur poids moléculaire

Commencez par traiter l’échantillon de protéines avec un tampon dénaturant composé d’un détergent - le dodécylsulfate de sodium, SDS, et d’un agent réducteur - bêta-mercaptoéthanol. Réchauffez-le brièvement. Au cours de cette étape, le bêta-mercaptoéthanol perturbe les liaisons disulfure, rendant une conformation dépliée à la protéine.

Les protéines dépliées avec leurs acides aminés hydrophobes exposés se lient au SDS chargé négativement et acquièrent une charge négative uniforme. Ajoutez un colorant de suivi approprié à l’échantillon pour une visualisation en temps réel.

Maintenant, chargez l’échantillon et le marqueur de taille moléculaire standard dans des puits séparés présents dans le gel d’empilement - la couche supérieure du gel de polyacrylamide contenant une concentration plus faible de polymères d’acrylamide réticulés.

Connectez l’appareil de gel rempli de tampon à l’alimentation électrique.

En présence d’un champ électrique, les protéines chargées négativement migrent librement vers l’anode et s’empilent pour pénétrer dans le gel de résolution - la couche inférieure contenant un gel de concentration plus élevée.

Dans le gel de résolution, les protéines commencent à migre