Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:55 min • July 8th, 2025
Pour évaluer le potentiel d’un composé larvicide d’essai, un antagoniste des récepteurs de la dopamine, à l’aide d’un test de contact larvaire, commence par des larves de moustiques vivantes à leur stade de développement ou de stade larvaire souhaité dans un milieu aqueux. Transférez un nombre égal de larves dans les puits d’une plaque à plusieurs puits.
Remplacez le média dans les puits par de l’eau désionisée pour éviter toute interférence de contaminants qui pourraient avoir un impact négatif sur les larves. Ajouter des concentrations croissantes de la substance d’essai dans les puits respectifs.
Faites tourner doucement la plaque pour faciliter le contact entre les larves et le composé d’essai. Incuber la plaque dans des conditions appropriées.
Au contact des larves, le composé d’essai pénètre dans la paroi corporelle ou la couche la plus externe et atteint les spiracles, ouvertures du système trachéal, qui sont reliées aux ganglions - amas de cellules nerveuses - constituant le système nerveux central.
Sur les cellules nerveuses, le composé testé se lie aux sites de liaison secondaires des récepteurs de la dopamine, qui sont impliqués dans les processus cellulaires critiques. Cette liaison, même avec le neurotransmetteur dopamine lié au récepteur de la dopamine, empêche l’activation du récepteur et la signalisation en aval, perturbant le développement larvaire, provoquant finalement la mort.
Noter le nombre de larves non réactives, sans mouvement, dans chaque puits à un moment précis après l’exposition au composé d’essai à diverses concentrations de composé.
L’augmentation du taux de mortalité larvaire avec l’augmentation de la concentration indique le potentiel larvicide du composé d’essai.
Pour commencer, étiquetez les puits d’une plaque de culture tissulaire transparente de 24 puits. Utilisez une balance analytique pour peser le composé d’essai. Ensuite, dissolvez le composé dans de l’eau stérile doublement distillée dans un tube de 1,5 millilitre, ce qui donne une solution mère de 80 millimolaires. Ensuite, diluez en série la solution mère à l’aide d’eau doublement distillée pour préparer des solutions mères de travail aux concentrations souhaitées.
Il convient de noter qu’il faut prendre soin d’éviter tout dommage physique aux larves lors de l’ajout des larves lors de l’ajout de l’eau en excès. Les blessures peuvent augmenter la mortalité et, par conséquent, produire des résultats faussement positifs ou invalider le test.
À l’aide d’une pipette de transfert en plastique de gros calibre, transférez cinq larves du troisième stade dans chaque puits de la plaque. Ensuite, utilisez une pipette de 1 millilitre pour retirer délicatement l’eau et remplacez-la par le volume souhaité d’eau doublement distillée.
Veillez à ne pas toucher les larves lorsque vous retirez l’eau. Travaillez rapidement pour vous assurer que les larves ne se dessèchent pas, et ajoutez doucement la chimie d’essai en pipetant contre le côté opposé du puits en plastique.
Ajoutez un volume approprié de solution d’analyse dans chaque puits et tournez doucement la plaque pour assurer un mélange uniforme. Placez la plaque dans une chambre de croissance, en maintenant un cycle lumière-obscurité de 12 heures à 25 degrés Celsius avec une humidité relative de 75 % à 85 %.
Pour vérifier le mouvement des larves, tapotez doucement la plaque. Si aucun mouvement n’est observé, touchez doucement la larve avec un cure-dent stérile. Classez la larve comme morte si aucune réponse n’est remarquée, et utilisez une feuille de pointage pour noter le nombre total de larves mortes dans chaque puits aux points temporels décrits dans le protocole textuel.