Criblage enzymatique à base de biomasse chromogène insoluble : un test pour évaluer l’activité de dégradation des enzymes de dégradation de la biomasse végétale
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:27 min • July 8th, 2025
La biomasse est une matière organique d’origine végétale composée principalement de polysaccharides complexes. Les enzymes dégradant les glucides agissent sur ces polysaccharides pour produire des oligosaccharides plus petits.
Pour évaluer l’activité de dégradation d’une enzyme, il faut commencer par prendre différents substrats de biomasse chromogène insoluble - ICB présents dans les puits d’une plaque réactionnelle poreuse. Ces substrats sont obtenus à partir de matériaux d’origine végétale teinturants avec un colorant chlorotriazine de couleur spécifique. La biomasse résultante a des polysaccharides complexes marqués à un colorant servant de substrat pour l’activité enzymatique.
Maintenant, ajoutez une solution tampon contenant une enzyme hydrolysante des glucides. Le tampon maintient le pH pour une activité enzymatique optimale. Placez la plaque de réaction sur un agitateur et incubez. L’agitation constante permet aux molécules enzymatiques d’atteindre le polysaccharide cible dans le substrat de l’ICB.
Pendant l’incubation, l’enzyme hydrolysante clive les liaisons glycosidiques covalentes dans les polysaccharides à longue chaîne. La réaction produit des oligosaccharides soluble
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