Dosage par sonde fluorescente : une technique pour visualiser le stress oxydatif dans les cellules organoïdes intestinales en culture traitées par des inducteurs d’espèces réactives de l’oxygène

Les organoïdes intestinaux récapitulent l’organisation crypte-villosité en forme d’intestin, ayant une lumière centrale comprenant des cellules mortes et des débris. La lumière est tapissée de cellules ressemblant à des villosités et de protubérances bourgeonnantes, semblables à des cryptes, abritant des cellules souches.

Différentes cellules organoïdes produisent des niveaux variables d’espèces réactives de l’oxygène, ROS - sous-produits des activités métaboliques, dont l’accumulation conduit à un stress oxydatif.

Pour visualiser le stress oxydatif dans des cellules variées, commencez par prendre une plaque multi-puits contenant des organoïdes 3D cultivés dans une matrice bas-bas. Les cellules souches organoïdes expriment une protéine de fluorescence verte ou une protéine marquée à la GFP qui aide à les distinguer pendant l’imagerie.

Complétez les puits avec de l’hydroperoxyde de tert-butyle - un inducteur de ROS - et incubez. L’inducteur active la NADPH oxydase liée à la membrane et stimule la production de ROS à l’intérieur des cellules. Les cellules souches, métaboliquement actives, produisent plus de ROS que les cellules différenciées.

Ajoutez des sondes fluorogéniques sensibl