Essai in vitro sur persistance : une méthode pour évaluer l’effet des osmolytes sur la persistance bactérienne

Lors de l’exposition à des conditions environnementales nocives, un sous-ensemble de bactéries entre dans un état de faible activité métabolique, échappant aux effets néfastes. Ces bactéries, appelées persistantes, peuvent tolérer une exposition transitoire à de fortes concentrations d’antibiotiques.

Pour étudier l’effet des osmolytes - petits solutés organiques - sur la persistance bactérienne, il faut d’abord obtenir une culture cellulaire bactérienne en phase exponentielle avec des persistants préexistants en dessous de la limite de détection, en suspension dans les milieux.

Ensuite, transférez la suspension dans les puits contenant de l’osmolyte d’une plaque de microréseau. Gardez un ensemble de puits sans osmolyte comme contrôle. Scellez la plaque avec une membrane perméable aux gaz pour permettre une diffusion rapide des gaz pour la croissance cellulaire et l’incubation.

Les osmolytes dans le milieu à des concentrations appropriées induisent un stress osmotique, incitant certaines cellules à reprogrammer leur métabolisme cellulaire d’une croissance rapide à lente, formant des persistants.

Maintenant, transférez les cellules traitées à l’osmolyte et les cellules témoins dans u