Dosage de l’activité récepteur-rapporteur d’œstrogène pour cribler l’activité œstrogénique des phytoestrogènes

Les œstrogènes sont des hormones stéroïdes qui agissent comme des molécules de signalisation endocrinienne et se lient aux récepteurs nucléaires - les récepteurs bêta des œstrogènes, formant des complexes de récepteurs œstrogènes-bêta.

Ces complexes ligand-récepteur se dimérisent et forment des homodimères dans le cytoplasme cellulaire. L’homodimère résultant pénètre dans le noyau, se lie à l’élément de réponse aux œstrogènes, ERE – une séquence d’ADN spécifique au sein du promoteur du gène cible – et initie la transcription.

Pour déterminer l’activité œstrogénique des phytoestrogènes – des métabolites secondaires d’origine végétale qui imitent la fonction des œstrogènes – commencez par une plaque multipuits contenant des cellules rapporteures en suspension dans un milieu approprié.

Les cellules rapporteures sont conçues pour surexprimer les récepteurs bêta des œstrogènes et transfectées avec un gène de la luciférase fusionné au promoteur ERE. Ajouter la solution d’échantillon contenant des phytoestrogènes et incuber.

Pendant l’incubation, le phytoœstrogène se lie aux récepteurs d’œstrogènes, bêta, exprimés dans les cellules rapporteures. Une fois liés, les complexes phytoestrogène