Spectroscopie de fluctuation de fluorescence pour étudier l’interaction des protéines aux contacts cellulaires

Les interactions cellule-cellule – médiées par des protéines à la surface des cellules voisines – peuvent être étudiées dans des cellules vivantes à l’aide d’un test de spectroscopie de fluctuation de fluorescence.

Tout d’abord, prenez des cultures cellulaires distinctes exprimant un récepteur d’adhésion – une protéine transmembranaire. Le récepteur dans les cellules des deux populations est marqué avec des protéines fluorescentes séparées spectralement. Ces marqueurs fluorescents sont présents sur la région cytoplasmique du récepteur, empêchant l’interférence avec l’interaction cellule-cellule.

Jetez le milieu et ajoutez de la trypsine, facilitant ainsi le détachement cellulaire. Mélangez les deux populations cellulaires et incubez, permettant aux récepteurs des cellules voisines de former des trans-interactions homotypiques.

Placez les cellules sous un microscope confocal. Illuminez l’échantillon à l’aide de sources laser de longueurs d’onde appropriées, provoquant une émission des deux étiquettes fluorescentes. Localisez deux cellules voisines avec des signaux de fluorescence de couleurs différentes en contact.

Effectuez un balayage linéaire (perpendiculaire à la région des memb