Spectroscopie de fluctuation de fluorescence pour étudier l’homo-oligomérisation des protéines
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:48 min • July 8th, 2025
La spectroscopie de fluctuation de fluorescence permet de déterminer l’état d’oligomérisation des protéines d’un échantillon.
Pour commencer, prenez une lame chambrée contenant une solution de monomère protéique marquée par fluorescence. Placez la lame sous un microscope confocal. Focalisez le faisceau laser sur une petite partie de l’échantillon – le volume confocal – pour exciter les monomères protéiques.
Les molécules de protéines diffusent à l’intérieur et à l’extérieur du volume confocal en raison du mouvement brownien. Ce mouvement provoque des changements rapides de l’intensité de la fluorescence, entraînant des fluctuations de l’intensité de la fluorescence au fil du temps.
Ajoutez l’agent dimérisant - un ligand bivalent qui aide deux monomères protéiques à se lier et, ainsi, à former un dimère. En raison de la dimérisation, deux marqueurs fluorescents se rejoignent pour former une seule particule, ce qui augmente l’intensité de fluorescence par particule - la luminosité moléculaire.
L’augmentation de la luminosité moléculaire due à la dimérisation augmente l’amplitude des fluctuations de fluorescence - lorsque deux marqueurs fluorescents entrent et sortent ensemble du volu
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques