Calorimétrie différentielle à balayage pour étudier l’interaction aptamère-ligand thermolabile de l’ADN
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 7:16 min • July 8th, 2025
La calorimétrie différentielle à balayage permet d’étudier les interactions biomolécule-ligand en mesurant la chaleur nécessaire pour dénaturer la biomolécule en l’absence et en présence du ligand.
Pour commencer, prenez une référence contenant des aptamères d’ADN libres – des oligonucléotides monocaténaires monocaténaires structurés – et un échantillon contenant des aptamères thermolabiles liés à des ligands. Les ligands stabilisent la structure secondaire de l’aptamère.
Effectuez un balayage avant en chauffant les solutions. Lorsqu’ils atteignent la température de fusion, les aptamères libres se dénaturent.
Les aptamères stabilisés par des ligands se dissocient des ligands et se dénaturent à une température relativement plus élevée, provoquant une augmentation de la température de fusion par rapport aux aptamères libres. À haute température, un sous-ensemble de ligands obtient une forme secondaire irréversible avec une faible affinité de liaison.
Ensuite, effectuez un balayage inversé en refroidissant les solutions afin de retrouver la structure de l’aptamère. À basse température, les ligands initiaux et convertis de l’échantillon se lient aux aptamères.
Au cours du deuxième bala
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