Essai de liaison compétitive pour identifier les composés perturbant les interactions récepteur-ligand

Le test de liaison compétitive identifie de petites molécules qui perturbent les interactions récepteur-ligand en se liant de manière compétitive à un récepteur cible, inhibant ainsi la liaison naturelle des ligands.

Pour identifier les interactions d’un récepteur avec son ligand naturel en présence d’un antagoniste de petites molécules spécifique au récepteur, commencez par une suspension de cellules lymphocytaires T humaines exprimant le récepteur cible.

Ajouter la suspension cellulaire dans les puits d’une plaque multipuits contenant des concentrations croissantes d’antagonistes. Couver. L’antagoniste se lie au site de liaison orthostérique - le site de liaison naturel du ligand du récepteur.

Ajoutez une concentration fixe de ligands naturels marqués par fluorescence dans les puits. Couver.

À de faibles concentrations, les antagonistes occupent peu de sites de liaison orthostériques, permettant la liaison naturelle des ligands aux récepteurs. Cependant, à des concentrations plus élevées, les antagonistes occupent la plupart des sites de liaison orthostériques, permettant une liaison naturelle ligand-récepteur minimale.

Centrifugeuse pour granuler les cellules. Jetez le surnagean