Microscopie TIRF pour visualiser la dynamique du couplage de l’actine et des microtubules

Les monomères d’actine polymérisent de la tête à la queue pour former de fines fibres, appelées microfilaments. De même, les dimères de tubuline polymérisent en microtubules cylindriques creux plus longs. Ces composants du cytosquelette maintiennent la forme cellulaire et facilitent la motilité cellulaire.

Pour visualiser la dynamique du couplage actine-microtubule par microscopie à réflexion interne totale, TIRF, prenez un assemblage d’imagerie personnalisé.

L’ensemble d’imagerie se compose de deux lamelles : une lamelle supérieure recouverte de silane m-PEG et une lamelle inférieure recouverte de biotine-PEG silane. Les deux lamelles sont espacées longitudinalement avec du ruban adhésif double face et scellées aux deux extrémités pour créer un canal d’écoulement.

Pipette BSA dans le canal d’écoulement pour amorcer la chambre. Ajouter la solution de streptavidine et incuber. Les molécules de streptavidine se lient aux molécules de biotine attachées au PEG-silane de la lamelle inférieure.

Flux de tampon TIRF dans le canal. Ajoutez une solution de mélange de cytosquelette contenant des dimères de tubuline non marqués et marqués au fluorophore vert, ainsi que des monomères d’actine n