Isolement magnétique de la microglie à partir du cerveau d’un bébé souris
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:45 min • July 8th, 2025
Les microglies – les macrophages résidant dans le cerveau – expriment CD11b, une intégrine de surface cellulaire.
Pour isoler la microglie du cerveau de petits souris, prélevez des fragments de cerveau dans des tubes de dissociation contenant un tampon contenant de la papaïne, une enzyme protéolytique, et de la désoxyribonucléase.
Placez les tubes sur un dissociateur mécanique. Pendant la course, le dissociateur perturbe mécaniquement les tissus.
La papaïne digère la matrice extracellulaire du tissu, libérant des cellules, y compris la microglie, en suspension. La désoxyribonucléase dégrade l’ADN libre en suspension, empêchant ainsi l’isolement cellulaire inefficace.
centrifugeuse. Complétez la dissociation mécanique par pipetage. Transférez la suspension à travers une passoire cellulaire pour éliminer les débris et les amas cellulaires, et obtenir une population unicellulaire homogène.
Incuber avec des microbilles superparamagnétiques fonctionnalisées avec des anticorps anti-CD11b. Les microbilles se lient spécifiquement à CD11b sur les cellules, y compris la microglie.
Post-incubation, centrifugeuse. Retirez le surnageant contenant les billes non liées. Résuspendez les cellules d
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