Visualisation de l’activation de la caspase dans des macrophages dérivés de monocytes humains

Dans les cellules immunitaires, la caspase-1, une caspase inflammatoire, est un composant immunitaire clé qui existe sous une forme inactive. Ces formes inactives consistent en une fusion pro-domaine avec un domaine catalytique et deviennent actives par dimérisation induite par proximité.

Pour visualiser l’activation de la caspase in vivo, commencez par une culture de macrophages dérivés de monocytes humains transfectés exprimant des protéines fluorescentes rouges et une paire de protéines rapporteures de complémentation fluorescente. Les protéines rapporteures contiennent un pro-domaine de la caspase-1 fusionnée avec des fragments non fluorescents de la protéine Vénus, soit Venus-N ou Venus-C.

Traitez les cellules avec un milieu d’imagerie contenant des lipopolysaccharides - un stimulant inflammatoire dérivé de bactéries, et des ionophores potassiques - la nigéricine.

Les lipopolysaccharides interagissent avec les récepteurs de reconnaissance de formes sur le macrophage, initiant l’assemblage d’un complexe d’inflammasome.

Les molécules de nigéricine pénètrent dans la cellule et se lient aux ions potassium, provoquant leur efflux dans le milieu extracellulaire et diminuant la conce