Un modèle murin d’uvéite mycobactérienne amorcée pour étudier l’uvéite post-infectieuse

L’inflammation chronique de l’œil, ou uvéite, à la suite d’une infection bactérienne systémique, est appelée uvéite post-infectieuse.

Pour générer un modèle d’uvéite post-infectieuse, prenez une souris anesthésiée préalablement immunisée avec Mycobacterium tuberculosis ou Mtb tué par la chaleur. L’amorçage – l’exposition préalable à l’immunogène – génère des lymphocytes T circulants spécifiques de Mtb.

Injectez le même immunogène dans la cavité vitrée de l’œil. Les mycobactéries se diffusent à travers l’humeur vitrée et se propagent dans l’œil. Les barrières oculaires-sanguines limitent l’entrée des cellules immunitaires dans l’œil, ce qui en fait un organe immunitairement privilégié.

Les cellules présentatrices d’antigène ou APC résidentes dans les tissus – dans la région périvasculaire – rencontrent l’immunogène diffus. Lors de l’internalisation de l’immunogène, les APC traitent l’antigène Mtb et l’affichent à la surface via le complexe majeur d’histocompatibilité ou CMH.

Les APC activés libèrent également des cytokines pro-inflammatoires qui provoquent la perméabilité de la barrière de jonction serrée endothéliale dans le vaisseau sanguin. Les leucocytes, y compris les neutrophiles et les lymphocytes T spécifiques de Mtb, extravasent dans l’espace périvasculaire.

Les lymphocytes T spécifiques de Mtb se lient à son antigène sur les APC et libèrent des cytokines pro-inflammatoires, qui incitent les neutrophiles à produire des espèces réactives de l’oxygène, ou ROS, et provoquent une dégranulation.

Les protéases granulaires et les ROS libérés provoquent la dégradation du parenchyme tissulaire et la rupture de la barrière oculaire-sanguine, exacerbant ainsi l’inflammation.

Le modèle d’infection est prêt pour l’analyse en aval.

Le jour de l’injection, après avoir confirmé la profondeur de l’anesthésie générale, anesthésie la cornée avec une goutte de tétracaïne à 0,5 % et dilate la pupille avec une goutte de phényléphrine à 2,5 %. Après avoir tamponné l’excès de liquide, ajoutez une goutte de bétadine à 5 % à la surface de l’œil et aux cheveux environnants pour réduire le risque d’endophtalmie.

Après deux à trois minutes, retirez la bétadine et couvrez l’œil avec du gel d’hypromellose à 0,3 % pour prévenir la sécheresse sous anesthésie et la formation de cataracte. Ensuite, chargez une seringue de 10 microlitres avec le mélange d’antigène et de fluorescéine. Ensuite, placez la souris en position couchée sur la plate-forme et utilisez les barres d’oreille droite et gauche pour fixer la tête de la souris.

Positionnez et orientez la souris sous la lunette de manière à ce que la face nasale supérieure de l’œil droit soit visible. Ensuite, à l’aide d’une aiguille de calibre 30, déplacez les cils, exposez la sclère et visualisez le limbe et le vaisseau sanguin radial.

Ensuite, à l’aide d’une aiguille stérile de calibre 30, faites un trou de guidage dans la sclérotique de 1 à 2 millimètres en arrière du limbe. Ensuite, insérez l’aiguille de calibre 34 fixée au support d’injection dans l’œil à travers le trou de guidage à un angle qui évitera la lentille, mais placez la pointe de l’aiguille dans la cavité vitrée.

À l’aide d’un contrôleur de pompe à micro-seringue, injectez soigneusement 1 microlitre d’extrait de M tuberculosis dans la cavité vitrée. En cas de reflux constant, augmentez le volume d’injection à 1,5 microlitre pour assurer une administration adéquate de la dose. Confirmez la mise en place intravitréenne en visualisant un réflexe verdâtre dans l’œil, et après dix secondes, retirez l’aiguille de l’œil.