Coloration des cellules bactériennes et préparation pour les études immunologiques

Commencez par un tube contenant une culture bactérienne en phase exponentielle, garantissant des bactéries uniformes et en croissance active pour des résultats cohérents.

Centrifuger pour collecter les cellules, aspirer le surnageant contenant des débris et remettre les cellules en suspension.

Introduisez un colorant fluorescent rouge perméable aux cellules. Les molécules de colorant pénètrent dans la membrane cellulaire bactérienne et atteignent le nucléoïde, se liant à l’ADN et conférant une fluorescence rouge aux bactéries.

Centrifugeuse pour granuler les bactéries colorées et aspirer le surnageant contenant un colorant non lié.

Remettez les bactéries en suspension dans un milieu de croissance pour maintenir la viabilité cellulaire.

À l’aide d’un photomètre, mesurez l’absorbance de la suspension bactérienne diluée à 600 nanomètres.

Comparez la valeur d’absorbance avec une courbe standard pour déterminer la concentration bactérienne.

Transférez le volume souhaité de la suspension bactérienne colorée dans un tube frais contenant un milieu de croissance. Il s’agit d’atteindre la concentration bactérienne souhaitée pour l’infection de la cellule hôte représentant la multiplicité de