Utilisation de l’hybridation in situ par fluorescence immuno-ARN pour visualiser le SRAS-CoV-2
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 2:59 min • July 8th, 2025
Prenez des cellules Vero infectées par un coronavirus fixes et perméabilisées, une lignée cellulaire de mammifère déficiente en interféron.
À l’intérieur de l’hôte, l’ARN viral est présent sous forme de sous-génomique ou d’ARNsg, des molécules d’ARN de longueur intermédiaire codant pour des protéines virales spécifiques synthétisées par transcription.
Ajouter des sondes d’hybridation, de réaction en chaîne ou d’initiateur HCR.
La sonde HCR se lie à sa séquence complémentaire sur l’ARN cible.
Introduire des sondes en épingle à cheveux oligonucléotidiques marquées par fluorescence, H-1 et H-2.
La sonde initiatrice se lie à sa queue H1 complémentaire, linéarisant la structure de l’épingle à cheveux.
La séquence H1 exposée se lie à sa queue H2 complémentaire.
La séquence H2 continue de se lier à une queue H1, amplifiant les sondes marquées par fluorescence autour de la zone cible et générant un signal robuste.
Ajoutez les anticorps appropriés pour visualiser le cytosquelette de la cellule hôte.
Colorer les noyaux à l’aide de DAPI.
Au microscope à fluorescence, les cellules infectées par le virus présentent une fluorescence rouge dans le cytoplasme, indiquant la présence de l’ARN cible.
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