Un test d’utilisation de l’ATP pour déterminer la survie bactérienne sous traitement antibiotique
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 2:56 min • July 8th, 2025
Commencez par ensemencer une culture bactérienne dans une plaque d’essai. Ensuite, incubez l’assiette.
Les cellules bactériennes ont des adhérences de surface et des pili qui leur permettent d’adhérer les unes aux autres, formant de petits agrégats.
Ajoutez des concentrations variables d’antibiotiques dans les puits, en laissant un non traité pour un contrôle.
Les molécules antibiotiques interagissent avec les bactéries sensibles, affectant leur capacité à croître et à se reproduire, entraînant leur mort.
Les bactéries résistantes aux antibiotiques restent métaboliquement actives, produisant des molécules d’ATP.
Utilisez un sonicateur pour perturber les cellules bactériennes, libérant leur contenu intracellulaire, y compris l’ATP.
Ajoutez un réactif de lueur d’utilisation de l’ATP contenant de la luciférine, de l’enzyme luciférase et d’autres cofacteurs.
La luciférase utilise l’ATP et l’oxygène pour convertir la luciférine en une oxyluciférine excitée.
L’oxyluciférine passe ensuite à son état fondamental, émettant une lumière luminescente.
Mesurez l’absorbance à l’aide d’un lecteur de plaques.
La diminution de l’absorbance à des concentrations d’antibiotiques plus élevées suggère u
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