Visualisation de la formation et de la fermeture des phagosomes par microscopie TIRF

Prenez une parabole à fond en verre recouvert de polymère contenant des globules rouges opsonisés aux IgG ou des globules rouges collés à sa surface.

Placez la parabole sur une platine de microscope à fluorescence à réflexion interne totale, en la maintenant à température physiologique.

Ajoutez des macrophages contenant des peptides cytoplasmiques marqués par fluorescence qui se lient à l’actine polymérisée, facilitant ainsi la visualisation du cytosquelette.

Pendant l’imagerie, dirigez un faisceau laser à un angle supérieur à l’angle critique, provoquant une réflexion interne et une génération d’ondes évanescentes au point de contact.

Les ondes évanescentes éclairent sélectivement les fluorophores à l’interface verre-échantillon, permettant une visualisation en temps réel de la phagocytose.

Les récepteurs Fc des macrophages se lient aux globules rouges opsonisés par les IgG, provoquant l’agrégation des récepteurs autour de la zone de contact.

Le regroupement déclenche les voies de signalisation intracellulaires et l’activation de la GTPase, entraînant la polymérisation de l’actine et le recrutement de dynamines, formant des pseudopodes.

Les pseudopodes s’étendent autour du globule