Mesure de l’activation des fonctions effectrices médiées par Fc par les anticorps HA
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:03 min • July 8th, 2025
Prenez des dilutions en série d’un anticorps ciblant l’hémagglutinine du virus de la grippe, ou HA, une glycoprotéine composée d’une tête globulaire et d’une tige.
Ajouter les dilutions sur des cellules de mammifères transfectées exprimant l’HA lié à la surface. Les anticorps se lient aux régions de la tige de l’HA, formant des complexes immuns.
Introduire des lymphocytes T modifiés exprimant des récepteurs Fc et codant pour un rapporteur de luciférase sous le contrôle du facteur de transcription NFAT.
Pendant l’incubation, l’anticorps lié à l’HA se lie au récepteur Fc, tandis que la tête HA se lie à l’acide sialique, déclenchant l’activation des lymphocytes T et augmentant la concentration de calcium cytosolique.
Cette activation déclenche une cascade de signalisation qui aboutit à la déphosphorylation de NFAT, déclenchant sa translocation nucléaire.
NFAT se lie à ses éléments de réponse dans le génome, entraînant l’expression de la luciférase.
Ajoutez un substrat bioluminescent perméable aux cellules. La luciférase oxyde le substrat, produisant un signal.
La diminution de la luminescence avec la diminution de la concentration d’anticorps confirme l’activation des lymphocytes T mé
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