Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:51 min • July 8th, 2025
Prenez une souris immunisée avec une métallopeptidase. Récoltez la rate et obtenez une suspension cellulaire.
Filtrez la suspension à travers un grillage et une centrifugeuse, en éliminant les débris tissulaires.
Les cellules isolées comprennent des lymphocytes B spécifiques de la métallopeptidase, produisant des anticorps contre les épitopes de la métallopeptidase.
Ajoutez des cellules myélomateuses immortelles dépourvues de l’enzyme HGPRT, empêchant ainsi la récupération des nucléobases pour la synthèse des nucléotides. Ils survivent grâce à la synthèse de novo de nucléotides.
Centrifuger pour obtenir une pastille et jeter le surnageant.
Ajoutez du PEG et incuberez, induisant la fusion des cellules myélomate-B pour former des hybridomes immortels HGPRT positifs.
Ajouter un milieu HAT composé d’hypoxanthine, d’aminoptérine et de thymidine. Transfert dans des puits contenant une couche nourricière de macrophages péritonéale, favorisant la croissance de l’hybridome.
L’aminoptérine bloque la synthèse de novo des nucléotides, provoquant la mort des cellules myélomateuses non fusionnées. Les lymphocytes B non fusionnés meurent en raison de leur courte durée de vie.
Les hybridomes posit
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