Technique de génération d’anticorps monoclonaux à partir de lymphocytes B spécifiques de l’antigène

Prenons l’exemple de vecteurs d’expression eucaryotes, codant soit pour une chaîne lourde d’anticorps, soit pour une chaîne légère d’anticorps, clonée à partir de lymphocytes B spécifiques de l’antigène.

Introduisez de la polyéthylénimine, un polymère cationique, qui interagit électrostatiquement avec les vecteurs chargés négativement, formant des polyplexes.

Incuber des cellules de mammifères avec les polyplexes, qui adhèrent aux cellules et sont internalisés par endocytose. Les endosomes qui en résultent fusionnent avec les lysosomes.

Les polymères contenus dans les polyplexes provoquent un gonflement osmotique de la vésicule, entraînant sa rupture et la libération des vecteurs.

Les vecteurs libérés pénètrent dans le noyau et sont transcrits en ARNm à chaîne lourde et à chaîne légère, qui subissent une traduction via les ribosomes sur le réticulum endoplasmique.

Les chaînes peptidiques résultantes s’assemblent en anticorps, qui sont transportés vers le Golgi et emballés dans des vésicules sécrétoires.

Lors de la fusion des vésicules sécrétoires et de la membrane cellulaire, les anticorps sont libérés extracellulairement.

Récolter le surnageant contenant des anticorps pour les tes