Administration d’anticorps par convection dans le cerveau d’une souris

Fixez une souris anesthésiée qui a une incision médiane crânienne à un cadre stéréotaxique.

Détectez le bregma, un point de référence sur le crâne, et déterminez le point d’injection.

Créez un trou de bavure à l’endroit, évitant d’endommager la dure-mère recouvrant le cerveau.

Prenez un cathéter étagé chargé d’anticorps, monté sur un robot stéréotaxique et connecté à une pompe à perfusion.

Le cathéter comprend un capillaire en silice fondue dépassant d’une aiguille métallique, créant un diamètre extérieur étagé au point de fusion.

Insérez le cathéter dans le parenchyme cérébral. Démarrez la pompe à perfusion pour créer un gradient de pression à l’ouverture du cathéter et délivrez les anticorps à un débit contrôlé, une technique connue sous le nom d’administration assistée par convection.

Le diamètre étagé comprime le tissu, créant un joint.

Le joint empêche le reflux liquidien et permet la distribution de grands volumes d’anticorps tout en réduisant le risque de lésions tissulaires.

Pour l’injection d’anticorps dans le striatum murin, confirmez une absence de réponse au pincement cutané chez une souris anesthésiée et rasez la tête avec une tondeuse à cheveux. Désinfectez la peau avec des cotons-tiges imbibés d’une solution iodée.

À l’aide d’un scalpel, faites une incision cutanée de 10 millimètres le long de la ligne médiane du crâne, en terminant au niveau de l’œil. Fixez la souris dans le cadre stéréotaxique à l’aide de la pince nasale et des barres d’oreille, en veillant à ce que la surface du crâne soit horizontale et bien fixée.

Placez la seringue dans le robot stéréotaxique et synchronisez le foret avec l’extrémité du cathéter sur un point de référence. Utilisez des pinces pour rétracter la peau et localisez le bregma à la surface du crâne. Faites référence à bregma dans le logiciel à l’aide de la pointe du foret et déplacez la perceuse vers l’avant de 1 millimètre et le latéral de 2 millimètres à partir de la position bregma.

Percez un trou de bavure, en prenant soin de ne pas endommager la dure-mère, et déplacez la seringue sur le trou de bavures. Distribuez 0,5 à 1 microlitre de la seringue pour vous assurer qu’il ne reste pas de bulles d’air dans le cathéter. Commencer l’administration assistée par convection comme démontré, en observant la surface du crâne pour toute trace de reflux de liquide à partir du point d’injection.

À la fin de l’administration et du retrait du cathéter, démarrez la pompe d’injection à 0,2 microlitre par minute pour vérifier s’il y a des signes d’obstruction du cathéter pendant l’injection. S’il n’y a pas eu de colmatage, une gouttelette de mélange d’injection doit être immédiatement observée provenant de l’extrémité du cathéter.