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Immunologie
0 vues • 2:28 min • July 8th, 2025
Prenez une colonne FPLC contenant une résine de verre poreuse avec de la protéine A immobilisée - une protéine bactérienne se liant aux anticorps. Équilibrez la colonne avec un tampon de pH neutre.
Ajoutez du liquide de culture cellulaire récolté sur des cellules ovariennes de hamster chinois, contenant des anticorps monoclonaux et contaminant les protéines et l’ADN.
La protéine A se lie à la région Fc de l’anticorps, les immobilisant.
Certains contaminants se fixent de manière non spécifique à la résine, tandis que le reste s’écoule.
Dans le chromatogramme, une absorbance UV accrue pendant le chargement de l’échantillon indique une concentration élevée de protéines dans le flux.
Laver avec le tampon d’équilibrage pour éliminer les contaminants non liés, indiqués par une diminution de l’absorbance.
Rincer avec un tampon à haute teneur en sel, en perturbant les interactions non spécifiques et en éliminant les contaminants, indiqués par un petit pic d’impuretés.
Ajoutez un tampon d’élution à faible pH pour perturber l’interaction entre la protéine A et les anticorps et éluer les anticorps, qui sont collectés en suivant le pic correspondant.
Neutraliser le pH des anticorps collectés p
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