Un test pour mesurer le titre d’anticorps neutralisants spécifiques du virus respiratoire syncytial

Prenez du sérum humain dilué en série, inactivé par la chaleur, contenant du virus respiratoire syncytial ou des anticorps neutralisants spécifiques du VRS.

Ajouter la suspension virale. Les anticorps neutralisent les virus en fonction de la dilution.

Introduire le mélange dans les monocouches de cellules épithéliales humaines et incuber pour l’adsorption virale.

Jetez le mélange. Ajouter un milieu contenant de la carboxyméthylcellulose, formant une couche semi-solide. Couver.

Le VRS utilise la machinerie de la cellule hôte pour synthétiser l’ARN et les protéines virales, qui s’assemblent ensuite et bourgeonnent sous forme de virions individuels.

Les cellules infectées finissent par mourir. La carboxyméthylcellulose limite le mouvement du virus, provoquant une infection localisée et la mort cellulaire, formant des plaques.

Retirez la superposition.

Fixez les cellules avec un tampon contenant de l’acétone. Introduisez un tampon bloquant contenant un détergent pour perméabiliser les cellules et empêcher les interactions d’anticorps non spécifiques.

Ajoutez des anticorps primaires ciblant les protéines virales.

Superposition avec des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores ci