Une technique d’immunofluorescence à double marquage pour visualiser les protéines de l’hôte et de l’agent pathogène dans une cellule infectée

Commencer avec des cellules épithéliales fixes et perméabilisées infectées par un parasite pathogène.

Ajoutez un tampon de blocage pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.

Superposition avec des anticorps primaires polyclonaux de souris, interagissant spécifiquement avec les protéines du parasite.

Ajoutez des anticorps secondaires marqués au fluorophore rouge lointain qui interagissent avec les anticorps primaires liés aux protéines parasites.

Laver pour éliminer les anticorps non liés. Bloquez avec des anticorps anti-souris qui se lient aux anticorps primaires, minimisant ainsi la réactivité croisée lors du marquage hôte-protéine.

Ajouter des anticorps primaires monoclonaux de souris ciblant les ribonucléoprotéines de l’hôte dans les cellules épithéliales.

Superposer avec un mélange d’anticorps secondaires marqués au fluorophore vert et de phalloïdine conjuguée au fluorophore rouge, facilitant le marquage des anticorps primaires liés aux protéines de l’hôte et de l’actine, respectivement.

Laver avec un tampon. Montage à l’aide d’un milieu contenant une coloration d’ADN, conférant une coloration bleue au noyau de l’hôte, au noyau du parasite et au kinétoplaste.

Analyse