Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 2:29 min • July 8th, 2025
Commencez avec un flacon contenant des cellules de mammifères transfectées de manière stable dans un milieu sans sérum complété par un tensioactif non ionique pour empêcher l’agrégation cellulaire.
Ces cellules portent un génome modifié contenant des gènes intégrés à chaîne lourde et légère pour la production d’anticorps thérapeutiques.
Introduisez le tryptone, une source riche en nutriments de peptides et d’acides aminés essentiels au métabolisme cellulaire.
La cellule utilise ces acides aminés et peptides, et se multiplie, ce qui entraîne une prolifération qui favorise un rendement en anticorps plus élevé.
L’expression des gènes dans les cellules entraîne la production de polypeptides à chaîne lourde et légère.
Dans le réticulum endoplasmique, ces chaînes se replient et se dimérisent via des liaisons disulfure inter-chaînes, formant des anticorps thérapeutiques.
Dans l’appareil de Golgi, les anticorps subissent des modifications post-traductionnelles. Ils sont ensuite emballés dans des vésicules et libérés dans le milieu.
Incuber les cellules pendant une durée plus longue pour augmenter la production d’anticorps.
Lorsque la viabilité cellulaire commence à décliner, récoltez le surnageant.
Filtrez le surnageant contenant des anticorps thérapeutiques et stockez-le à une température plus basse pour une utilisation ultérieure.
Cellules de semence à 2 x 105 cellules par millilitre dans 100 millilitres de milieu sans sérum dans deux flacons. Incuber les cellules à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone à 120 rotations par minute pendant 24 heures. À la culture enrichie en nutriments, ajoutez du tryptone à une concentration finale de 0,5 %. Ensuite, utilisez un milieu sans sérum pour égaliser le volume de la culture non supplémentée. Incuber les cellules pendant sept jours supplémentaires.
À partir du huitième jour de culture, comptez les cellules quotidiennement à l’aide d’un hémocytomètre pour surveiller la viabilité cellulaire. Une fois que la viabilité cellulaire atteint moins de 80 %, récoltez la culture par centrifugation à 3 000 fois g pendant 15 minutes. Ensuite, stérilisez le surnageant à l’aide d’un filtre de 0,22 micromètre. Stockez les surnageants à 4 degrés Celsius à court terme ou congelez-les à long terme.