Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:03 min • July 8th, 2025
Prenez une colonne de chromatographie d’affinité contenant des billes d’agarose conjuguées à la protéine A, une protéine de liaison aux anticorps.
Ajouter un tampon de liaison avec un pH neutre pour équilibrer la colonne.
Chargez le surnageant de culture à partir d’une culture cellulaire productrice d’anticorps, contenant des anticorps monoclonaux et contaminant les protéines cellulaires.
Le pH neutre facilite la liaison de la protéine A à la région Fc des anticorps pendant que les contaminants circulent.
Mesurez l’absorbance UV du flux pour créer un chromatogramme. Une absorbance élevée lors du chargement de l’échantillon indique que les protéines ne sont pas liées dans le flux.
Lavez la colonne avec le tampon de liaison pour éliminer les contaminants non spécifiquement liés.
Ajoutez un tampon d’élution à faible pH pour perturber l’interaction protéine A-anticorps. Recueillir les anticorps élués en surveillant le pic d’absorbance.
Neutralisez le pH pour éviter la dégradation des anticorps et transférez-les dans un filtre centrifuge.
Centrifugeuse pour concentrer les anticorps et les remettre en suspension dans un tampon pour les dosages en aval.
Après avoir préparé les tampons et
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