Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prenez une section de cerveau murin composée du gyrus denté de l’hippocampe, un site de neurogenèse composé de progéniteurs neuronaux à des stades de différenciation distincts.
Transférez la section dans une solution de blocage de la perméabilisation. Les molécules détergentes de la solution pénètrent les cellules, tandis que les protéines bloquent les sites de liaison non spécifiques.
Ajoutez un cocktail d’anticorps primaires ciblant des marqueurs de neurogenèse spécifiques, une protéine associée aux microtubules et une protéine de filament intermédiaire.
Retirez les anticorps non liés. Introduire différents anticorps secondaires marqués au fluorophore qui se lient aux anticorps primaires.
Ajoutez des protéines sériques du même hôte que l’un des anticorps primaires, en saturant les paratopes des anticorps secondaires.
Introduire des fragments Fab monovalents qui saturent les épitopes des protéines sériques, empêchant ainsi la liaison non spécifique.
Ajoutez un deuxième anticorps primaire élevé par le même hôte, en se liant à une autre protéine de filament intermédiaire.
Introduire des anticorps secondaires marqués au fluorophore ciblant le deuxième anticorps primaire.
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