Une technique de coloration d’organe entier pour l’imagerie tridimensionnelle du rein

Prenez un rein de souris fixe. Les lipides dans les tissus provoquent la diffusion de la lumière, et les pigments provoquent l’absorption de la lumière, rendant les cellules opaques.

Traitez les tissus avec CUBIC-L pour la délipidation et la décoloration. L’alcool aminé contenu dans CUBIC-L élimine les lipides et les pigments, minimisant la diffusion de la lumière et augmentant la transparence.

Les molécules détergentes de CUBIC-L perméabilisent également les cellules.

Introduire un cocktail d’anticorps primaires qui se lie à la tyrosine hydroxylase cytoplasmique dans les neurones des nerfs sympathiques et à l’actine musculaire alpha-lisse dans les cellules musculaires lisses des vaisseaux.

Ajoutez des anticorps secondaires marqués au fluorophore qui se lient aux anticorps primaires.

Effectuer une post-fixation tissulaire pour préserver le traitement par anticorps.

Immergez le tissu dans CUBIC-R+ qui remplace l’eau et correspond à l’indice de réfraction des protéines, minimisant davantage la diffusion de la lumière et augmentant la transparence.

Sous un microscope à fluorescence à feuillet de lumière, des feuillets de lumière éclairent le tissu, excitant les fluorophores.

Capturez