Un test d’immunofluorescence pour détecter les agrégats d’alpha-synucléine dans une section de biopsie cutanée

Prenez la cryosection d’une biopsie cutanée d’un patient atteint de la maladie de Parkinson enfermée dans un milieu d’enrobage.

Le tissu comprend un épiderme le plus externe, un derme sous-jacent et de la graisse sous-cutanée innervée par les nerfs.

Lavez la section pour retirer le support d’enrobage. Transférez-le dans une solution de blocage de la perméabilisation, perméabilisant les cellules et bloquant les sites de liaison non spécifiques.

Immergez la section dans un cocktail d’anticorps primaires pour obtenir un marquage uniforme des anticorps, appelé coloration flottante.

Les anticorps pénètrent dans les neurones et se lient aux agrégats d’alpha-synucléine répartis le long des axones – une forme agrégée caractéristique des maladies neurodégénératives – et aux hydrolases carboxyl-terminales.

Introduire des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores qui se lient aux anticorps primaires.

Traitez avec un colorant fluorescent qui tache le noyau.

Placez le mouchoir sur une lame, appliquez un support de montage et scellez-le avec une lamelle.

Au microscope confocal, la fluorescence des deux anticorps révèle la présence d’agrégats d’alpha-synucléine le long des axones des neuro