Immunomarquage de cellules encapsulées dans un système d’hydrogel 3D

Prenez une plaque multi-puits contenant des cellules de mammifères encapsulées dans un système d’hydrogel imitant l’environnement naturel de la matrice extracellulaire.

Retirez le milieu de culture. Traiter avec un tampon de fixation pour réticuler les protéines, préservant ainsi l’intégrité cellulaire.

Ajouter une solution contenant un détergent pour perméabiliser la membrane cellulaire.

Introduisez une solution bloquante pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques dans les étapes suivantes.

Ajoutez un cocktail d’anticorps primaires qui pénètre dans les cellules et se lie spécifiquement aux filaments intermédiaires cytoplasmiques et au facteur de transcription cible.

Retirez les anticorps non liés. Introduisez des anticorps secondaires marqués par fluorescence et une coloration nucléaire pour marquer l’ADN par fluorescence.

Retirez les molécules non liées.

Montez la culture d’hydrogel sur une lame à l’aide d’un support de montage.

Utilisez un microscope confocal pour observer les cellules immunomarquées.

Tout d’abord, aspirez le milieu de chaque puits. Ensuite, lavez les puits avec 1 millilitre de DPBS chaud. Une fois le lavage terminé, ajoutez 750 microlitres de solution