Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:59 min • July 8th, 2025
Commencer avec des cellules érythroblastiques humaines collées.
Introduire des conjugués d’anticorps modifiés par des peptides dérivés du virus. Ces conjugués contiennent une séquence de localisation nucléaire, ou NLS, du virus, et un résidu d’acide cholique.
Pendant l’incubation, les conjugués d’anticorps interagissent avec les récepteurs de surface cellulaire et s’internalisent dans les endosomes.
L’acide cholique contenu dans le conjugué aide à s’échapper du compartiment endosomal, permettant l’accumulation intracellulaire, tandis que les protéines de transport et le NLS facilitent leur localisation nucléaire.
Introduisez de la trypsine et un tampon contenant de l’EDTA pour détacher les cellules et éliminer les conjugués liés à la surface.
Ajouter un milieu enrichi de sérum pour inhiber l’activité de la trypsine.
Centrifugeuse pour recueillir les cellules, les fixer et les perméabiliser.
Introduire des anticorps secondaires marqués au fluorophore rouge lointain, se liant à des conjugués localisés et laver.
Traiter avec un colorant nucléaire.
Observez au microscope confocal et capturez des images à différentes profondeurs planes.
Après le traitement de l’image, la cellule présent
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