Perfusion contrôlée d’anticorps spécifiques du peptide Aβ et d’oligomères Aβ dans l’hippocampe du rat

Prenez un rat éveillé avec deux canules guides implantées bilatéralement dans l’hippocampe.

Les canules sont reliées à des pompes osmotiques implantées par voie sous-cutanée contenant respectivement des anticorps bêta-amyloïdes ou Aβ et des anticorps de contrôle.

Une forte concentration d’anticorps à l’intérieur de la pompe induit la diffusion de l’eau des tissus environnants à travers sa membrane externe semi-perméable, élargissant ainsi la couche osmotique.

Cette expansion comprime le réservoir d’anticorps, facilitant la libération contrôlée d’anticorps.

Fixez deux canules internes à des cathéters remplis d’eau stérile reliés à une pompe à perfusion.

Remplissez les canules d’eau.

Ensuite, aspirez un petit volume d’air, créant une bulle.

Maintenant, remplissez les canules avec des oligomères Aβ neurotoxiques, des agrégats solubles de peptides Aβ.

Insérez les canules internes dans les canules de guidage. Démarrez la pompe pour une distribution contrôlée des oligomères, en utilisant la bulle d’air pour éviter le reflux et suivre le débit d’infusion.

Administrer des injections répétées d’oligomères pendant la durée requise.

Le modèle est prêt pour l’étude des interactions oligomère-anticorps Aβ.

Un jour avant l’installation, remplissez les pompes osmotiques avec l’anticorps 6E10 ou l’anticorps de contrôle IgG1 selon les instructions du fabricant. Placez les pompes dans de l’eau distillée stérile et maintenez-les à 37 degrés Celsius pendant la nuit pour activer les pompes.

Une fois que le rat a été anesthésié avec de l’isoflurane à 3 % et rasé entre les omoplates, désinfectez la peau avec une solution de gluconate de chlorhexidine à 2 % et d’alcool isopropylique à 2 %. Après avoir pratiqué une incision de 2 centimètres avec un scalpel entre les omoplates, localisez les cathéters PE-50 connectés à la canule de guidage.

Ensuite, coupez les extrémités des cathéters PE-50 contenant du ciment dentaire avec un scalpel. Connectez les pompes osmotiques aux cathéters PE-50 et ajoutez un peu de ciment dentaire à la jonction de la pompe et du cathéter pour sécuriser la connexion. Enfin, cousez bien la peau avec des sutures 4/0. Remettez l’animal dans sa cage sur un coussin chauffant chaud et surveillez-le lorsqu’il se réveille de l’anesthésie à l’isoflurane.

Après avoir préparé la solution d’oligomères bêta-amyloïdes comme indiqué précédemment, laissez la solution s’agréger dynamiquement et spontanément pendant 1 heure à température ambiante avant la perfusion. Ensuite, remplissez chaque seringue avec 5 microlitres d’eau distillée stérile.

Ensuite, coupez deux cathéters PE-50 d’environ 60 centimètres de long avec un scalpel. Utilisez deux seringues de 1 millilitre munies d’aiguilles de calibre 21 pour remplir les deux cathéters avec de l’eau distillée stérile. Pendant que les seringues de 1 millilitre restent en place, à une extrémité de chaque cathéter, connectez les extrémités libres aux seringues Hamilton. Retirez les seringues de 1 millilitre et vérifiez qu’il n’y a pas de bulles d’air dans les cathéters.

Insérez la canule interne à l’extrémité des cathéters PE-50. Utilisez les seringues Hamilton pour remplir chaque canule interne jusqu’à 1 microlitre, puis faites une bulle d’air en tirant le piston vers l’arrière jusqu’à la marque des 2 microlitres.

Mélangez maintenant la solution d’oligomères bêta-amyloïdes en pipetant de haut en bas à l’aide d’une pointe d’adhérence minimale. Évitez de former des bulles pendant le mélange. Ensuite, remplissez les deux canules internes avec 1,5 microlitre de solution d’oligomères bêta-amyloïdes en ramenant les pistons à 3,5 microlitres.

Ensuite, marquez des lignes avant et après la bulle d’air dans les deux cathéters. Cela sert de point de contrôle de la perfusion en cours. Placez le rat éveillé dans une prise câline et immobilisez sa tête. Retirez la canule factice de la canule à deux guides, puis insérez la canule interne préalablement préparée dans la canule guide. Vérifiez qu’ils sont bien insérés et bien fixés à la base de la canule de guidage. Maintenant, libérez le rat de la prise douillette et remettez-le dans sa cage pour limiter le stress de manipulation.

Allumez la pompe à perfusion et injectez 1 microlitre de solution d’oligomère bêta-amyloïde à raison de 0,1 microlitre par minute. Pendant la perfusion, vérifiez que le piston de la seringue passe de 3,5 microlitres à 2,5 microlitres et que les bulles d’air dans les deux cathéters PE-50 se déplacent en continu. Vérifiez le rat pour vous assurer que les cathéters ne se tordent pas.

Laissez la canule interne en place pendant encore 5 minutes après la perfusion pour permettre une diffusion efficace de la solution d’oligomères bêta-amyloïdes. Après la perfusion, ramenez le rat dans la prise douillette et retirez la canule interne et la canule de guidage bouchée pour éviter le reflux de la solution injectée. Placez la canule factice qui s’est arrêtée juste avant le bras d’angle de la canule de guidage. Enfin, remettez l’animal dans sa cage.