Une technique in vitro pour étudier le trafic des récepteurs du glutamate dans les neurones de l’hippocampe

Prélever trois échantillons de cultures neuronales de l’hippocampe sur des lamelles.

Introduire des anticorps primaires pour marquer les récepteurs du glutamate exprimés en surface.

Ajouter un milieu conditionné aux deuxième et troisième échantillons pour induire l’endocytose des récepteurs liés aux anticorps.

Sur le troisième échantillon, ajoutez des fragments Fab pour bloquer les épitopes sur les anticorps non endocytosés.

Introduire un inhibiteur pour bloquer l’endocytose des récepteurs tout en permettant le recyclage des récepteurs à la surface.

Dans tous les échantillons, fixez les cellules et ajoutez une solution de blocage pour éviter l’étiquetage non spécifique.

Introduire des anticorps secondaires marqués au fluorophore pour marquer les anticorps primaires sur les récepteurs liés à la surface, y compris les récepteurs recyclés.

Perméabiliser les membranes cellulaires.

Ajoutez à nouveau l’anticorps primaire au premier échantillon pour marquer les récepteurs endocytosés préexistants.

Introduire un anticorps secondaire différent marqué au fluorophore dans tous les échantillons pour marquer les anticorps primaires liés au récepteur endocytosé, en distinguant les récepteurs end