Un test in vitro pour mesurer la phagocytose cellulaire dépendante des anticorps par les phagocytes
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:03 min • July 8th, 2025
Prenez des microsphères marquées par fluorescence conjuguées à un antigène d’intérêt. Les antigènes immobilisés sont liés à des anticorps spécifiques de l’antigène.
Ajoutez des leucocytes, y compris des lymphocytes non phagocytaires, des granulocytes phagocytaires et des monocytes. Incuber le mélange dans des conditions physiologiques.
La région Fc de l’anticorps immobilisé se lie au récepteur Fc du phagocyte, déclenchant la phagocytose cellulaire dépendante des anticorps, ou ADCP.
Centrifuger pour granuler les cellules et jeter le surnageant contenant des microsphères non internalisées.
Ajoutez une coloration de viabilité qui pénètre dans les cellules mortes, en les marquant par fluorescence.
Centrifuger pour granuler les cellules et éliminer le surnageant.
Ajoutez des anticorps marqués par fluorescence qui se lient aux leucocytes.
Centrifuger pour éliminer le surnageant et fixer les cellules.
À l’aide de la cytométrie en flux, éliminez d’abord les cellules mortes qui sont positives pour la coloration de viabilité.
Ensuite, sélectionnez les leucocytes viables et faites la distinction entre les granulocytes, les monocytes et les lymphocytes en fonction de leur granularité et de leu
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