Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prenez un tube contenant une suspension de bactéries intestinales humaines.
Ajoutez des particules de type virus de norovirus humain, ou VLP. Les VLP contiennent une capside virale intacte mais n’ont pas d’ARN génomique, ce qui les rend non infectieuses pour les humains.
Pendant l’incubation, les protéines de la capside VLP se lient à des glucides spécifiques exprimés à la surface bactérienne, formant des complexes VLP-bactéries.
Centrifuger pour granuler les complexes et jeter les VLP non liés.
Introduisez une solution bloquante contenant des protéines pour bloquer les sites de liaison d’anticorps non spécifiques, réduisant ainsi la coloration de fond dans les étapes suivantes.
Ajoutez des anticorps spécifiques à la VLP marqués par fluorescence et incuber.
Les anticorps se lient à leurs sites cibles sur la capside VLP, marquant les complexes VLP-bactéries.
Centrifugeuse pour granuler les complexes. Jetez les anticorps non liés et remettez la pastille en suspension dans un tampon de cytométrie en flux.
À l’aide d’un cytomètre en flux, détectez les signaux de fluorescence émis par les complexes VLP-bactéries, ce qui permet de quantifier le pourcentage de bactéries liées dans l’échan
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