Un essai in vivo pour détecter la mitohagie chez les nématodes transgéniques
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:39 min • July 8th, 2025
Prenez des nématodes transgéniques, dont les cellules musculaires de la paroi corporelle expriment la DCT-1 marquée au fluorophore vert, une protéine de membrane mitochondriale externe, et la LGG-1 marquée au fluorophore rouge, une protéine membranaire de phagophore.
Placez les vers sur un milieu de croissance contenant un médicament induisant la mitophagie.
Le médicament endommage les mitochondries cellulaires, initiant la mitophagie ou l’élimination sélective des mitochondries endommagées.
DCT-1 sur les mitochondries endommagées subit une ubiquitination et une phosphorylation, facilitant l’interaction avec LGG-1 sur la membrane du phagophore.
Le phagophore s’étend autour des mitochondries pour former un autophagosome ciblé pour la dégradation lysosomale.
Placez les nématodes dans un anesthésique sur une lame de microscope pour les immobiliser et placez une lamelle.
Sous un microscope à fluorescence, visualisez les taches jaunes à l’intérieur des cellules musculaires, indiquant la co-localisation de DCT-1 émettant une fluorescence verte et de LGG-1 affichant une fluorescence rouge. Cela confirme l’apparition d’une mitophagie.
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