Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 5:01 min • July 8th, 2025
Prenons l’exemple d’une cryosection tissulaire de carcinome rénal présentant des lymphocytes T CD8+ infiltrants dans son microenvironnement tumoral.
Traitez-le avec de l’acétone pour fixer et perméabiliser les tissus. Laver pour enlever l’excès d’acétone.
Ajoutez de l’avidine pour saturer la biotine du tissu endogène. Ensuite, ajoutez de la biotine pour bloquer les sites de liaison à l’avidine immobilisés, minimisant ainsi les interactions non spécifiques.
Appliquez du sérum contenant des immunoglobulines pour bloquer les récepteurs Fc des cellules immunitaires, empêchant ainsi la liaison d’anticorps non spécifiques.
Ajouter un cocktail d’anticorps primaires ciblant CD8, un marqueur cytotoxique des lymphocytes T, et-1 et Tim-3, récepteurs inhibiteurs exprimés par les sous-populations de lymphocytes T CD8+ résistantes à l’immunothérapie.
Introduire des anticorps secondaires distincts marqués au fluorophore ciblant les anticorps anti-CD8 et anti-Tim-3.
Ajoutez des anticorps secondaires biotinylés ciblant les anticorps anti--1 et une autre streptivideine marquée au fluorophore se liant à la biotine.
Appliquez un agent d’enrobage contenant un colorant pour colorer les noyaux cellulaire
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