Une technique d’immunofluorescence pour la localisation de protéines virales dans des cellules infectées

Commencez par une lame contenant des cellules hôtes collées.

Ajoutez des virus et laissez-les pénétrer dans les cellules hôtes.

Retirez le produit usé. Ajouter un milieu frais pour permettre la synthèse et le transport des protéines virales.

Utilisez du paraformaldéhyde pour préserver la morphologie cellulaire et l’emplacement des protéines.

Ajoutez des molécules de détergent pour rendre les cellules perméables.

Appliquez une mémoire tampon de blocage pour bloquer les sites de liaison non cibles.

Ajoutez des anticorps primaires qui se lient aux protéines virales cibles. Retirez les anticorps non liés.

Superposition d’anticorps secondaires conjugués au fluorophore rouge pour le marquage fluorescent des protéines virales. Retirez les anticorps non liés.

Ajoutez un produit de montage contenant un colorant nucléaire fluorescent pour colorer les noyaux.

À l’aide de la microscopie confocale, observez l’emplacement des protéines virales fluorescentes rouges et des noyaux hôtes fluorescents bleus.

Un signal rouge plus fort autour de la zone bleue indique une localisation cytoplasmique, tandis qu’un signal plus fort à l’intérieur suggère une localisation nucléaire.

Des niveaux de signal éga