Méthode in vitro pour identifier des cellules immunitaires innées et adaptatives résidant dans des poumons murins

Prélever du tissu pulmonaire murin haché dans un tampon de digestion et incuber à une température physiologique.

Les enzymes tampons décomposent la matrice tissulaire, relâchant les cellules.

Triturez pour dissocier la masse cellulaire et filtrez la suspension à l’aide d’une passoire pour isoler les cellules individuelles.

Centrifugeuse pour éliminer le surnageant avec les débris tissulaires. Incuber les cellules avec un tampon de lyse pour lyser les globules rouges.

Centrifugeuse pour éliminer le surnageant contenant des débris cellulaires. Remettez les cellules en suspension et transférez-les dans une microplaque.

Ajoutez des anticorps pour bloquer les récepteurs Fc, empêchant ainsi la coloration de fond.

Introduire un cocktail d’anticorps marqués au fluorophore ciblant des marqueurs de surface spécifiques sur les cellules immunitaires innées - monocytes, macrophages, cellules dendritiques, cellules tueuses naturelles, neutrophiles, éosinophiles et cellules immunitaires adaptatives - lymphocytes B et T.

Fixer et perméabiliser les cellules. Ajouter des anticorps marqués au fluorophore spécifiques d’un marqueur intracellulaire sur les monocytes, les macrophages, les cellules dendri