Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:34 min • July 8th, 2025
Commencez par des cellules de mammifères infectées par le virus qui produisent plusieurs caspases, dont la caspase-3.
Ajouter un milieu de croissance dans le puits témoin et un milieu complété par un inhibiteur de la caspase-3 dans le puits d’essai.
Dans le puits témoin, la caspase-3 reconnaît et dégrade les nucléoprotéines virales et les protéines de l’hôte essentielles à la propagation virale.
Dans le puits de test, l’inhibiteur pénètre dans la cellule, inhibant l’activité de la caspase-3 et empêchant la dégradation des protéines.
Délogez les cellules de la plaque. Ajoutez un réactif de lyse et de la chaleur pour induire la lyse cellulaire, libérant des protéines intracellulaires.
Chargez les deux échantillons sur un gel de polyacrylamide SDS et de l’électrophorèse pour séparer les protéines en fonction de leur taille.
Après l’électrophorèse, transférez le gel sur une membrane buvard.
Traitez la membrane avec des anticorps primaires contre les nucléoprotéines virales et les protéines de l’hôte.
Laver et superposer avec des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores qui se lient aux anticorps primaires, générant des bandes fluorescentes.
La fluorescence plus élevée dans l’éc
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